毛細管色譜柱是色譜儀器的核心部件,說它是一個儀器的“心臟”絕不為過。色譜柱在整個檢測過程中起著樣品分離的作用,選用的是否合適決定這整個實驗的成敗,因此,每個使用色譜的人員都應(yīng)該深入地地掌握毛細管色譜柱的基本知識。
毛細管色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后,就可以對色譜柱進行老化,對色譜柱加熱至恒定溫度,通常取其使用溫度上限,超過色譜柱的溫度上限極易損壞色譜柱。當(dāng)達到老化溫度后,記錄并觀察基線,初始階段基線應(yīng)持續(xù)上升,在達到老化溫度后5-10min開始下降,并且會持續(xù)30-90分鐘。當(dāng)達到一個固定的值后,就會穩(wěn)定下來。如果在2-3個小時后基線仍無法穩(wěn)定,或者在15-20分鐘后仍無明顯的下降趨勢,那么有可能系統(tǒng)裝置有泄漏或者污染。遇到這樣的情況,應(yīng)該立即將柱溫降到40度以下,盡快的檢查系統(tǒng)并解決相關(guān)的問題。如果繼續(xù)老化,不僅對色譜柱有損壞,而且始終得不到正常穩(wěn)定的基線。
一般來講,涂有極性固定相和較厚涂層的色譜柱老化時間較長,貳弱極性固定相和較薄涂層的色譜柱所需老化時間較短。而PLOT色譜柱的老化方法又各不相同。需按照毛細管色譜柱供應(yīng)商提供的老化條件進行老化。在色譜柱老化過程結(jié)束后,采用程序升溫做一次空白試驗,一般是從40℃/min從50℃升到高使用溫度,達到高使用溫度后保持10min,這樣我們會得到一張流失圖,這些數(shù)值可以后作對比試驗,并且對實驗問題的解決有幫助。
在空白試驗的色譜圖中,不應(yīng)該有色譜峰出現(xiàn),如果出現(xiàn)了色譜峰,通常可能拾從進樣口帶來的污染物,如果在正常使用狀態(tài)下,色譜柱性能開始下降,基線的信號值會增高,另外,如果在較低的溫度下,色譜柱的保存用進樣墊將色譜柱的兩端封住,并放回原包裝,再次安裝時要將色譜柱的兩端截去一部分,保證沒有進樣墊的碎屑殘留于柱中。